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磁珠法PCR產(chǎn)物純化回收試劑盒說(shuō)明書(shū)

Magbind PCR Purification Kit

目錄號(hào)：YJ2516

運(yùn)輸條件：室溫（15-25℃）。

保存條件：MBPure 2-8℃保存，其他組分室溫（15-25℃）保存。

組分說(shuō)明

                       Size          5 ml       60 ml

                       MBPure        5 ml       60 ml

                       Buffer PW    12 ml     3×48 ml

                       Buffer EB     6 ml       60 ml

              本產(chǎn)品僅供科研使用，請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途

               上海研謹(jǐn)生物中國(guó)生物試劑生產(chǎn)商  

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

　　本試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單、快速、的核酸純化方法。MBPure與樣品按一定比

例混合后，磁珠選擇性的將核酸吸附。漂洗后，洗脫得到的DNA純度高，A260/A280                                   的比值在1.7-1.9之間，A260/A230的比值通常在2.0以上。經(jīng)該試劑盒純化得到的  DNA適用于測(cè)序，克隆等下游實(shí)驗(yàn)。

試劑盒說(shuō)明

      Sample type         Typical yield     Sample type        Typical yield

      5000 bp segment      Up to 90%      1000 bp segment       Up to 90%

      500 bp segment       Up to 80%       200 bp segment       Up to 80%

純化回收得率的計(jì)算

   我們建議通過(guò)瓊脂糖電泳純化前后的樣品進(jìn)行回收得率的計(jì)算。我們不建議通過(guò)

260 nm處的光吸收值來(lái)計(jì)算回收得率。因?yàn)槿芤褐袉捂?、雙鏈DNA和dNTP以及一些純

化前的某些雜質(zhì)在260 nm處都有光吸收，這樣在計(jì)算回收前樣品中 DNA濃度時(shí)會(huì)得到

一個(gè)假的、虛高的DNA濃度值。

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備及重要注意事項(xiàng)

1．嚴(yán)禁冰凍、離心。冰凍、離心可能會(huì)對(duì)磁珠造成不可逆的損害。

2．磁珠長(zhǎng)期放置后會(huì)聚集成團(tuán)，從而使磁珠表面積減小，降低樣品回收得率，使用前

   一定要渦旋振蕩*混勻磁珠（這一過(guò)程通常需要渦旋振蕩20秒）。

3．本試劑盒不適用于純化回收小于100 bp的DNA片段，如果要回收小于100 bp的DNA

   片段，可將MBPure的用量增加到樣品體積的4倍。

自備儀器

1．恒溫混勻儀——建議使用Eppendorf設(shè)計(jì)生產(chǎn)的Thermomixer。

2．磁力架——建議使用DynaMagTM-2(Cat. No. 12321D)。

操作步驟（手動(dòng)）

   1．渦旋振蕩MBPure 20秒，使其*混勻?yàn)榫蝗芤骸?/SPAN>

   2．向1.5 ml的離心管中加入待純化的PCR產(chǎn)物或其他DNA樣本，然后加入2倍樣品體積的MBPure。渦旋振蕩混勻后，室溫下在1400 rpm的Thermomixer上振蕩5分鐘。

注意：如無(wú)Thermomixer，可將離心管連續(xù)顛倒混勻10分鐘。

   3．將上一步的離心管放于磁力架上，直至磁珠*吸附（約需1分鐘）。

   4．保持離心管固定于磁力架上，棄去溶液，期間避免接觸磁珠。

   5．向上一步的離心管中加入500 μl Buffer PW后，將離心管從磁力架上取下，渦旋振蕩

      10秒鐘后將離心管重新放回磁力架。靜置1分鐘，待磁珠*吸附于離心管側(cè)壁后*棄去漂洗液。

   6．重復(fù)步驟5。

   7．保持離心管固定于磁力架上靜置放置10分鐘，使乙醇*揮發(fā)干凈。

      注意：如果磁珠干燥過(guò)度會(huì)極大的降低DNA的回收得率。

   8．將離心管從磁力架上取下，加入20-100 μl Buffer EB，渦旋振蕩將磁珠重懸于洗脫液

      中后將離心管放于65℃、1400 rpm的Thermomixer上振蕩洗脫5分鐘。

注意：如無(wú)Thermomixer，可將離心管放于65℃水浴鍋或金屬浴中孵育。孵育期間每隔2分鐘渦旋震蕩5秒鐘。

   9．將離心管放于磁力架上直至磁珠*吸附（約需1分鐘）。

   10.將洗脫液轉(zhuǎn)移至一個(gè)新的1.5 ml離心管中。此時(shí)，可棄去磁珠。